包装清单：
货号 | 产品名称 | 产品包装 |
P1112 | Protein L凝胶预装柱AKTA柱 | 1ml/支 |
— | 说明书 | 1份 |
参数：
指标名称 | 指标 |
外观 | 乳白色半透明球状颗粒 |
配基 | Protein L |
基球 | 4%高交联琼脂糖 |
动态载量(mgIgG/mL) | 10 |
平均粒径(μm) | 90 |
运行流速(cmh) | ≤500 |
工作温度(℃) | 4-40 |
耐压( MPa) | 0.3 |
pH稳定性 | 2-9(工作)；2-10(CIP) |
化学稳定性 | 常用的水相缓冲液，6M盐酸胍，1%SDS，70%乙醇，8M尿素 |
储存 | 20%乙醇 |
简介：
本填料是以4%高度交联琼脂糖凝胶为基质，通过基因工程改造的重组Protein L为配基的亲和层析介质。重组Protein L去除了天然蛋白的非特异性结合域（如白蛋白结合域），显著提高了抗体纯化的选择性和载量。适用于从腹水、血清、细胞培养上清等复杂样品中纯化单克隆抗体、多克隆抗体及Fc标签蛋白。
使用本品经过一步亲和层析，即可从样品中得到高纯度的抗体，应用广泛。
本产品为即用型预装柱，适合于培养液、血清、腹水或杂交瘤细胞培养上清中的IgG的纯化，或含Fc片段的重组蛋白的纯化。
本预装柱中使用的Protein L为重组蛋白，特异性强。本产品中的重组Protein L可与多数哺乳动物IgG的Fc端特异性结合。该重组Protein L通过改造，仅保留了与IgG Fc端结合相关的氨基酸序列，去除了结合位点以外可能导致非特异性结合的序列，从而可以有效减少非特异性结合。
本预装柱中的琼脂糖物理化学稳定，有相对较高的线性流速。本产品中的Protein L共价连接到4%的高交联度、高流速琼脂糖上。每毫升Protein L 中共偶联有约6-8mg的重组Protein L。每毫升Protein L 可以结合约10mg兔IgG。本产品平均直径为90μm，蛋白纯化时的推荐线性流速为50-400cm/h，耐压指数为0.008MPa。
本预装柱可重复次数多。本预装柱再生后，重复使用3-5次几乎不影响其结合能力。
本预装柱具有标准接口，使用方便。本类型的预装柱为高纯度聚丙烯柱体，低吸附，规格有1ml和5ml两种，鲁尔接口，可适配商品化的各类中压液相纯化系统，如ÄKTA系统(也被称为AKTA系统)等；如果使用注射器或蠕动泵，需要相应的接头进行连接，否则容易出现预装柱内部压力过高而导致推不动甚至漏液的情况，如果没有相应的接头，不推荐连接注射器或蠕动泵使用。
本类型的预装柱有1ml和5ml两种，相应的体积为Protein L在预装柱中压实后的体积，并保存在20%乙醇溶液中。
保存条件：
4ºC保存，一年有效。请勿冷冻。
注意事项：
1. 请勿冷冻保存本产品。
2. 包装中的下堵头请保存好，用于预装柱再生后的密封。
3. 从蛋白样品收集开始，所有步骤中蛋白样品都必须在4ºC 或冰上操作。
4. 请按照IgG最大结合量的80%以内准备样品，抗体纯化效果更佳。一般血清的总IgG含量在10-15mg/ml。细胞培养上清中的抗体浓度与杂交瘤克隆密切相关，胎牛血清(FBS)中的抗体也同时会被纯化。
5. 无论是首次使用预装柱，还是再生后使用，都需要严格按照使用说明充分平衡预装柱。平衡不充分会严重影响预装柱的蛋白结合量。
6. 本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品，不得存放于普通住宅内。
7. 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
使用说明：
1. 需要用户自己准备的试剂
a. Binding buffer (结合缓冲液)：PBS 或PBS pH7.4
b. Elution buffer (洗脱液)：100mM glycine, pH2-3
c. Neutralization buffer (中和缓冲液)：1M Tris-HCl, pH8.8
d. Storage solution (凝胶保存液)：20%乙醇
2. 准备工作
a. 用0.45微米或0.2微米孔径的滤膜过滤所用的溶液。
b. 所有的溶液必须用超声等方法脱气(degas)。
c. 将预装柱和所有溶液平衡至室温。
3. 抗体纯化
a. 稀释：为确保样品溶液有合适的离子强度和pH值，上柱之前先用Binding buffer至少按1:1比例稀释血清、腹水或细胞培养液样品；也可将样品装入截留分子量为3.5kDa的透析袋中，于4ºC 冰箱中用Binding buffer透析过夜。
注意：血浆样品在稀释过程中有可能由于血浆中的脂蛋白沉淀而浑浊，只需10,000g离心20分钟取上清即可。
b. 平衡：安装好预装柱，打开预装柱上面的帽子(上堵口)，连接纯化系统的Binding buffer，折断或剪断下口，用10倍柱体积的Binding buffer洗涤并平衡预装柱。对于规格为1ml的预装柱，流速可以控制为1ml/min；对于规格为5ml的预装柱，流速可以控制为5ml/min。使预装柱中的琼脂糖凝胶处于与目的蛋白相同的缓冲体系下，起到保护蛋白的作用。在洗涤和平衡过程中勿使预装柱滴干。
c. 上样：混匀稀释的样品，避免产生气泡。把样品从预装柱的上端加入，建议流速为1ml/min (1ml预装柱)或5ml/min (5ml预装柱)，这样能保证目的蛋白与琼脂糖凝胶充分接触，提高目的蛋白的回收率。同时收集穿流液(flow-through)，待检测。为了获得更好的抗体结合效果可将穿流液再上样，重复2遍(或将样品1次性加入层析柱后置于摇床上，轻轻摇动，结合30min)。
注意：如果样品的粘度比较大，即使上样体积比较少，也会造成预装柱有很大的反压，所以如果样品粘度大，需要适当稀释。同时，上样量勿超过柱子的最大结合能力，一般不超过80%为宜，而且大量的样品体积也可能造成很大的反压，使得进样器较难使用。
d. 洗涤：样品结合后，用20倍柱体积的Binding buffer洗涤预装柱以去除非特异性吸附的杂蛋白，建议流速为1ml/min，收集洗涤液。洗涤过程中勿让预装柱滴干。洗涤是否完全可以通过测定收集的洗涤液的280nm吸光度，最后的洗涤液的吸光度应该和Binding Buffer的吸光度或通过色谱系统测定紫外吸收达到一个稳定的基线而确定。
e. 洗脱和中和：按每毫升洗脱液加入100μl Neutralization buffer的比例，在收集管中预先加入适量Neutralization buffer。在上一步洗涤完后，通常按5倍柱体积的Elution buffer洗脱结合的抗体。收集洗脱液，每管0.5ml-1ml。
f. 分管收集洗脱下的抗体，根据蛋白浓度、SDS-PAGE电泳或后续的检测效果确定洗脱峰在哪几个收集管中。
g. 根据使用目的保存样品或将收集的蛋白透析到其目的储存液中。
4. 预装柱的再生
a. 用5倍柱体积的Regeneration Buffer (100mM glycine, pH2.0)洗涤预装柱。
b. 用5倍柱体积去离子水清洗预装柱。
c. 用5倍柱体积的Storage solution平衡预装柱，最后保存在等体积的Storage solution中，下堵口旋紧后4ºC保存。
5. 纯化样品的检测
将纯化过程中得到的样品(包括原始样品、穿流液、洗涤液及洗脱液)用SDS-PAGE进行检测，判定其纯化效果。
